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    TUNEL检测
    目录号:MY-26 规格:

    TUNELTdT-mediated dUTP nick end labeling)技术原理是通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)介导带有显色系统或荧光的dUTP连接到凋亡细胞或凋亡小体中由核酸内切酶切断的DNA短链3’-末端缺口,从而可进行组织切片和培养细胞的凋亡检测,实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞凋亡测定,并可检测出极少量的凋亡细胞,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高,因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。  

       

    技术路线:

     

     

     

     

     

     

     

     

    技术要点

    1.  使用pH中性的固定液固定组织或者细胞,避免使用酸性或者碱性固定液,以免出现人为DNA损伤;推荐使用4%甲醛溶液(溶于pH7.4 PBS中)。

    2.  在操作过程中避免出现干片现象。

    3.  根据标本类型决定孵育时间(蛋白酶KTdT等),保证最佳效果。

    4.  使用过程避免将TdT酶置于冰上;避免反复冻溶。

    使用新鲜的H2O2溶液,孵育后立即将标本放入PBS清洗(H2O2可导致DNA损伤)。

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    参考资料

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    京公网安备 11011402011307号

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